一.細胞介紹
P815細胞吞噬小粒乳汁但不吞噬酵母聚糖或卡介苗。 沒有抗體依賴的細胞毒作用。 硫酸右旋糖苷、LPS或PPD不能抑制細胞生長。 檢測表明肢骨發育畸形病毒(鼠痘)陰性。 在本庫通過支原體檢測。
二.細胞特性
（1）來源：小鼠 肥大細胞；肥大細胞瘤
（2）形態：懸浮，部分輕微貼壁生長。貼壁細胞可用刮刀刮下后繼續培養
（3）含量：>1x10?cells
（4）規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
（5）用途：僅供科研使用。
三.培養基及培養凍存條件準備
（1）準備1640基礎培養基; 10%優質胎牛血清; 1%P/S.
注意事項：
1.復蘇的P815活細胞收到之后，細胞多數呈懸浮狀態，可能有些許細胞貼壁。請將全部細胞懸液轉移到離心管，將剩下貼壁的細胞吹打脫壁后（刮刀刮下）一并收集，1000rpm離心5min，加入10-15ml培養液重懸后移植到2個T25培養瓶內培養。
2.傳代周期：以20萬細胞/ mL密度開始培養，并在培養過程中維持細胞密度在10萬細胞/毫升到100萬細胞/mL。
3.傳代比例：以20萬細胞/毫升密度開始培養，并在培養過程中維持細胞密度在10萬細胞/ mL至100萬細胞/ mL。
（2）培養條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
（3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
四.運輸和保存
（1）凍存細胞：1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。
（2）復蘇好的活細胞：T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理：
（1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。
（2）請在4或5x顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據。
（3）貼壁細胞：細胞在37℃培養箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養瓶中灌液培養基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養瓶中）,加入新配制的完全培養基6-8mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
（4）注意：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1：2傳代。
細胞處理：
（1）凍存細胞的復蘇：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8mL完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
（2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：
1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4mL含10%FBS的培養基來終止消化。
3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8mL按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
（3）細胞凍存：收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。
下面以T25瓶為例：
（1）細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/mL。
（2）1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞，按每1mL凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/mL分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。
（3）將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80℃冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存，同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。
當前位置：
微信咨詢
暫無評價信息！