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          K1(GLAG-66) 人甲狀腺癌細胞

          英文名稱: K1

          產品編號: CL-503h

          價格: ¥2980

          規格:
          1×10?cells
          數量: - +

          詳細介紹

          細胞介紹

              從58歲男性原發性乳頭狀甲狀腺癌中分離建系,細胞維持甲狀腺濾泡細胞分化,如合成甲狀腺球蛋白。細胞表達野生型p53腫瘤抑制基因。文獻報道K1細胞來源于甲狀腺細胞系GLAG-66。

          細胞特性

          來源:乳頭狀甲狀腺癌組織

          形態:上皮細胞樣,貼壁生長

          含量:>1x10?cells

          規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

          用途:僅供科研使用

          細胞運輸、保存及注意事項


          復蘇細胞

          凍存細胞

          包裝

          充液的T25細胞培養瓶

          1mL凍存管

          運輸條件

          常溫

          干冰

          保存方式

          75%酒精消毒瓶壁,置于37恒溫細胞培養箱

          -80℃冰箱中保存過夜后轉入液氮/立即復蘇

          注意事項

          ① 收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁,將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯系我們;

          ② 請在45X顯微鏡下確認細胞狀態,同時給剛收到的細胞拍照,10X20X2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態的依據;

          ③ 貼壁細胞:細胞在37℃培養箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細胞在運輸過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,可去除培養瓶中灌液培養基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養瓶中),加入新配制的完全培養基6-8mL,放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上,可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收;

          ④ 運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶12傳代。

          培養基及培養凍存條件準備:

          完全培養基

          F12K 培養基;優質胎牛血清,10%;雙抗,1%

          培養條件

          氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%;溫度:37;培養箱濕度為70%-80%

          凍存

          90%血清 + 10%DMSO,現用現配

          細胞復蘇、傳代、凍存操作

          (一)凍存細胞的復蘇

          將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4~6mL完全培養基的離心管中混合均勻,1000rpm/min離心3~5min,棄去上清液。加入1mL完全培養基重懸細胞后,均勻鋪于含6~8mL完全培養基的培養瓶(或皿)中,置于37℃恒溫細胞培養箱中過夜培養。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況。

          注意:建議復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩,避免凍存管處于溫差較大情況下發生爆炸造成人員傷害。

          (二)細胞傳代

          ① 待細胞密度達到80%~90%時,即可進行傳代培養。

          ② 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,吸凈殘余的PBS。

          ③ 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中(T251-2mL,T752-3mL),置于37℃培養箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間),顯微鏡下觀察細胞大部分變圓并脫落,即可輕拍培養瓶至細胞全部脫落。迅速拿回操作臺,加入2倍體積的、10%FBS的培養基終止消化。

          ④ 將細胞懸液移入離心管中,1000rpm/min離心3-5min,棄去上清液。

          ⑤ 向細胞沉淀中加入1~2mL完全培養基重懸細胞,輕吹混勻。將細胞懸液按11比例均勻鋪于2個新的培養瓶/皿中,添加6~8mL完全培養基,置于37℃恒溫細胞培養箱中培養。后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

          (三)細胞凍存

          ① 細胞凍存時,步驟同細胞傳代的①~④,細胞計數后,加入配制好的細胞凍存液,重懸細胞,按照1×106 ~ 1×107個細胞/mL分配到一個凍存管中,標注好名稱、代數、日期等信息。

          ② 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80℃冰箱中過夜,之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。

          注意事項:

          所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。


          服務熱線:400-027-5700

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